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        不想挑晶體?原位晶體篩選,測試和結構解析方法

        更新時間:2020-08-04點擊次數:1848

          X射線晶體衍射儀經歷了快速發展的10年,我們的光源越來越強,探測器越來越快,數據處理越來越智能。儀器的進步,大大提高了我們的晶體數據收集的效率和成功率,讓我們有更多的時間研究更深入的問題。然而好的晶體永遠都是一位的尤其對于蛋白質晶體來說,獲得能夠衍射的晶體,仍然是主要的瓶頸之一。通常,為了檢驗蛋白質晶體的衍射質量,我們需要從晶體板上挑出晶體,加上防凍劑,冷凍,放到衍射儀上,然后測試。然而所有這些步驟都有可能損壞晶體。低溫晶體篩選不僅耗時耗力,而且我們沒有辦法避免這些操作過程對晶體衍射質量的影響。

         

          幾年前,在同步輻射出現了原位晶體學的方法:快速,方便,可以直接在晶體生長環境下研究晶體的衍射。原位的方法避免了低溫晶體學在晶體轉移過程中對晶體的損害。同樣在室內衍射儀上,Bruker D8 VENTURE-ISX STAGE同樣完美地實現了原位晶體篩選評估:

         

          1.切換方便,5分鐘內即可完成樣品臺的安裝和拆卸

          2.軟件控制,只需要鼠標點擊即可快速對整個晶體板的每個結晶空進行查看

          3.自動多樣品隊列衍射實驗

          4.快速表征晶胞參數,識別晶體以及后續的數據收集

         

         ▲ ISX Stage mounted on D8 VENTURE

         

        實驗案例:GlucoseIsomerases晶體篩選和測試

         

        儀器配置:D8VENTURE IµS 3.0,PHOTONII,ISX STAGE

        樣品:GlucoseIsomerases結晶初篩48孔板,96個drop

        總時間:1h(查看96個drop:30min;衍射28個晶體:30min;晶胞表征:10min)

         

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        晶體查看,挑選

         

         

         ▲ ISX Stage Software Control

         

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        確定晶體篩選隊列

         

         ▲ 挑選用于自動篩選的晶體

         

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        自動隊列晶體衍射實驗

         

         

         ▲ 30min,6個孔,28個晶體樣品篩選結果

         

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        數據收集

         

        室溫下,原位對4顆晶體進行數據收集,然后合并數據,使用MR解析結構。

         

         

         ▲ 原位常溫數據采集和結構解析

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